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浅谈 激光共聚焦显微镜特点及应用

发布时间:2024-09-05 05:00:07作者:开云app入口登录

  激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)是基于共轭焦点技术设计的显微镜类型,即为使激光光源、被测样品和探测器都处于彼此的共轭位置上。

  在一般的显微镜中通过将物镜的焦平面与探测器重合使得观测的像平面与相邻的轴平面隔离开来,而在共聚焦显微镜中利用衍射受限的光点照亮样品,并在该光点共轭焦点处的收集光路径中使用针孔来过滤杂散光达到产生这种隔离效果来提升分辨率。

  上图所示结构中,只有在共轭的样品层反射回的光能够最终靠收集光路径中的小孔,其余无关的样品层反射被小孔阻隔。这能够获得显著的分辨率的提升。如下图所示的是同一厚样品的多维荧光显微镜和共聚焦显微镜的并排比较。当在不同的焦平面上拍摄一系列图像时,可以生成通常被称为“z叠层”的图像,这一图像显示了共聚焦显微镜提供的分辨率和对比度增益以及这些增益的最终的原因。能够正常的看到在成像平面位于组织上方的堆栈顶部检查图像不难发现荧光图像中带有大量的散射光,而共聚焦显微镜的图像则显示为黑色。这种轴向上的PSF的减少直接引发了z叠层中间光学界面上观察到的分辨率差异。

  德国马克斯·普朗克生物物理化学研究所的A. Politi、J. Jakobi以及P. Lenart等人通过Hoechst 44432对海拉细胞的DNA染色,使用微管蛋白抗体Alexa 488对微管染色以及鬼笔环肽Abberior STAR Red对F-肌动蛋白染色,使用LSCM得到了高效、超高分辨率的大视察视野的海拉细胞图像,帮助更好的了解了海拉细胞的结构和发展变化。

  Dr. Gerry Apodaca等人通过用iDISCO对透明化的小鼠膀胱进行成像,获得了清晰且完整的小鼠膀胱图,有助于揭示小鼠膀胱内部运动的机理。

  Deng等通过两种 N-硫代羧基内酸酐(MeSPG-NTA和Sar-NTA)的顺序分段投料聚合合成两亲性嵌段共聚物。通过纳米沉淀法、双乳液法等自组装方法,PMeSPG-b-PSar能分别形成纳米和微米尺度的聚类肽囊泡。在LSCM的表征下,由双乳液法获得的微米囊泡在 H2O2刺激下随时间逐渐崩解的过程被完整记录下来。将一种疏水的光敏剂四苯基卟啉(TPP)引入到 PMeSPG-b-PSar囊泡体系中,TPP可通过疏水相互作用附着在囊泡膜上,在光刺激下会引起囊泡崩解[2]。

  Ibáñez等人通过LSCM对收割不同谷物在镰刀上产生的光泽做测量,并测试了八种不同的加工材料(骨头、鹿角、木材、新鲜皮、干皮、野生谷物、驯化谷物和芦苇)产生的光泽,并通过一系列分析软件建立预测模型数据库,首次证明了基于LSCM对使用磨损光泽的定量分析可以轻松又有效地识别用于加工不同接触材料的工具[3]。

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