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【48812】高质量数据新规范Cytek编写45色全光谱流式计划二重奏(剖析+分选)

发布时间:2024-08-16 06:54:25作者:藤仓气缸

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  高质量数据新规范,Cytek编写45色全光谱流式计划二重奏(剖析+分选)

  ,全景式描绘了人外周血单个核细胞的免疫图谱,一起深化发掘了回忆T细胞的免疫表型。该45色计划选用Cytek®全光谱流式剖析途径做优化,随后无缝联接到Cytek®全光谱流式分选途径--计划不只在剖析途径上出现出高质量的数据体现,在分选途径也以高度一致的数据分辩率完结成果的平移,并成功完结稀有细胞的分选且坚持了细胞功能性。这一计划续写经典,再创打破,有望被遍及应用于肿瘤免疫、本身免疫、药物研制、感染性疾病、神经退行性疾病等许多范畴。

  因为OMIP-069文章发表于2020年,在此之后,试剂厂家连续研制出新式染料,为高维计划的优化和拓宽带来了更丰厚的挑选。40色计划的部分荧光试剂存在货期问题,亦或是出现了数据体现更优的平替试剂。图中出现的6种试剂,均与原计划的荧光素类似度较高,替换时无需对计划做出额定调整。

  系列试剂来源于Cytek公司,染色指数与原计划适当乃至更优。CD24 cFluor YG610优化了对于蓝激光激起的荧光素的spread,也改进了针对非B细胞的非特异性结合的问题(图1D)。CD57 cFluor B532替换FITC,染色指数显着提高,一起还可优化与BB515的spread(类似指数:BB515/FITC 0.98;BB515/cFluor B532 0.89)

  Aurora™剖析体系和Aurora™ CS分选体系搭载专利的全光谱剖析技能(Full Spectrum Profiling™, FSP™),试验计划可以在双途径间完结无缝联接,高质量成果仅需“复制粘贴”,大大简化了分选试验的流程。文章运用5激光的Aurora™和Aurora™ CS途径,选用相同的增益条件、参阅对照、数据收集与试验剖析模版,同一样品在3台剖析仪与1台分选仪上别离进行获取,从降维可视化成果来看,4台仪器出现的成果高度堆叠,这为完结多中心规范化打造了一体化的途径。

  CS分选途径,可以高精度地分辩细胞亚群,尤其是聚集低份额细胞,而且一管样天性轻松完结6路一起分选,节省了时刻和资源

  随后,将分选收集到的细胞在37℃, 5% CO2培养箱中静置过夜,次日用PMA和离子霉素影响,再用胞内标志物IFNγ、IL-2、TNF-α、IL-17进行染色,配色时挑选分选的细胞上非共表达目标的荧光素。6种细胞出现出天壤之别的细胞因子表达趋势,说明在免疫反响中各自或许扮演着不同的人物。

  众所周知,OMIP-069是第一篇将40种荧光素合为一管的具有里程碑含义的文章。

  本文的45色计划不只完结了“复刻经典”,而且逐渐提高规范,创始性地在全光谱剖析和分选流式双途径,平行展示了45色计划的高质量数据,也完结了6路分选高维计划中低份额细胞的技能打破

  。该计划根据健康人PBMCs优化,能愈加进一步拓宽应用到患者血样或许安排样本,为免疫疗法、癌症监测、药物研制、靶标筛查等范畴开辟更多元的思路。

  Cytek Biosciences, Inc.(Nasdaq: CTKB)作为一家全球技能抢先的生命科学技能公司,经过其受专利维护的全光谱剖析(

  ,FSP™)技能,供给高分辩率、高参数和高灵敏度的新一代细胞剖析东西。Cytek的立异技能经过查验测验荧光信号的完好光谱信息,以完结更高水平更高灵敏度的多参数检测。Cytek的FSP™途径包含其中心仪器 ——Aurora和Northern Lights™剖析体系、Aurora CS分选体系,Amnis®和Guava®品牌下的流式细胞仪和成像产品,以及试剂、软件和服务,为客户供给全面和完好的解决计划。Cytek总部在美国加利福尼亚州Fremont,在全球设有分部和分销途径。